一、細(xì)胞株說明書

        細(xì)胞株或細(xì)胞系在引進(jìn)時(shí)，需要查閱正規(guī)的培養(yǎng)物保藏中心的有關(guān)細(xì)胞株系的編號(hào)或產(chǎn)品號(hào)。如惡性黑色素瘤A375細(xì)胞株，在ATCC(TheAmericanTypeCultureCollection，美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心）的保藏號(hào)為CRL-1619。

        從各地保藏中心購(gòu)買引進(jìn)的細(xì)胞株都應(yīng)該配套有對(duì)應(yīng)的細(xì)胞株說明書，內(nèi)容包括細(xì)胞株的寄存者（MAX初建立株系的負(fù)責(zé)人）、培養(yǎng)時(shí)所用培養(yǎng)基和血清的要求、是否貼壁生長(zhǎng)或懸浮生長(zhǎng)、建株來源組織細(xì)胞種類、繁殖條件（培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基種類、血清添加量、其他添加物、CO2濃度、培養(yǎng)溫度等）、傳代要求（傳代時(shí)機(jī)、傳代比例等）、凍存條件（凍存液組方、凍存溫度）等。在引進(jìn)前要充分了解該細(xì)胞株的說明書內(nèi)容，尤其要熟知細(xì)胞株的繁殖條件、傳代要求和凍存條件等事項(xiàng)。

        二、細(xì)胞增殖

        典型培養(yǎng)條件下的動(dòng)物細(xì)胞、人類細(xì)胞，會(huì)正常進(jìn)行細(xì)胞分裂，日漸增加細(xì)胞數(shù)量。可增殖細(xì)胞是細(xì)胞具有良好活性的特征。

        增殖也是細(xì)胞固有的屬性之一，不同細(xì)胞株的增殖周期不同，多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞的增殖周期或細(xì)胞周期是20-24h。

        哺乳動(dòng)物細(xì)胞的分裂是二分裂，如果是20-24h分裂一次，那么細(xì)胞生長(zhǎng)克隆的細(xì)胞數(shù)與培養(yǎng)天數(shù)（n)的關(guān)系可以表達(dá)為2n-1，如此，第1、2、3、4天的細(xì)胞個(gè)數(shù)分別為1、2、4、8、16。對(duì)于靜態(tài)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，依據(jù)此關(guān)系，通過鏡檢獨(dú)立的細(xì)胞克隆，計(jì)數(shù)平均每個(gè)獨(dú)立細(xì)胞克隆的細(xì)胞個(gè)數(shù)，則非常容易知道是哪天進(jìn)行的接種培養(yǎng)。

        三、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

        （一）概述

        在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)一定的體外培養(yǎng)體系中，無菌培養(yǎng)條件下，動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況和生長(zhǎng)速度與接入的細(xì)胞密度有關(guān)系。描述細(xì)胞生長(zhǎng)的連續(xù)變化中細(xì)胞密度與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系，往往用細(xì)胞生長(zhǎng)曲線表示，包括遲緩期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、穩(wěn)定期和衰退期。正確的生長(zhǎng)曲線描述，依賴正常的培養(yǎng)條件和無菌操作，并且需要熟練的細(xì)胞計(jì)數(shù)操作。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是以細(xì)胞密度為縱坐標(biāo)、累計(jì)培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)作圖描繪的折線圖，也可以直接以細(xì)胞密度作縱坐標(biāo)、累計(jì)培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)在半對(duì)數(shù)表上作圖描繪的折線圖。若每隔24h測(cè)定細(xì)胞密度，可用天（d)作累計(jì)培養(yǎng)時(shí)間單位，若隔12h或更短時(shí)間測(cè)定細(xì)胞密度，建議使用小時(shí)（h)作累計(jì)培養(yǎng)時(shí)間單位。

        作為細(xì)胞生長(zhǎng)曲線觀察用的培養(yǎng)物，在后續(xù)培養(yǎng)過程中，不得改變培養(yǎng)體系即培養(yǎng)液的體積，要確保培養(yǎng)條件的穩(wěn)定。需要換液時(shí)采用定量換液方法操作，使用同樣體積的新鮮培養(yǎng)液替代廢棄培養(yǎng)液，不干擾細(xì)胞團(tuán)，不取出細(xì)胞。培養(yǎng)條件包括溫度、CO2濃度、趨飽和濕度，一般要求二氧化碳培養(yǎng)箱37℃、5%CO2濃度、相對(duì)濕度90％以上的條件下進(jìn)行哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。

       （二）生長(zhǎng)曲線對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的意義

        典型的生長(zhǎng)曲線包括遲緩期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、穩(wěn)定期和衰退期這4個(gè)時(shí)期。生長(zhǎng)曲線也是細(xì)胞株具有的*屬性，不同細(xì)胞株的生長(zhǎng)曲線圖形不*一致。

        日常培養(yǎng)的細(xì)胞株用于某種目的前，建議預(yù)先培養(yǎng)以便觀察其細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，了解該細(xì)胞株的合理接種密度。

        (1)當(dāng)接種細(xì)胞密度足夠高時(shí)，將不出現(xiàn)典型的遲緩期或遲緩期很短，并且到達(dá)衰退期的累計(jì)培養(yǎng)時(shí)間MAX短。進(jìn)行細(xì)胞藥理或細(xì)胞毒理試驗(yàn)時(shí)，預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞接種密度往往控制在1×105-2×105/ml范圍，以便在加載供試藥物時(shí)，所培養(yǎng)的細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期并已形成單層或接近單層。

        (2)當(dāng)接種細(xì)胞密度合理時(shí)，會(huì)出現(xiàn)典型的遲緩期，并且到達(dá)衰退期的累計(jì)培養(yǎng)時(shí)間比較短。正因?yàn)槿绱?，進(jìn)行傳代培養(yǎng)、原代培養(yǎng)、擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，一般細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)都要控制接種密度在2×104-5×105/ml范圍。

        (3)當(dāng)接種細(xì)胞密度太低時(shí)，會(huì)出現(xiàn)很長(zhǎng)的遲緩期，很難觀察到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、穩(wěn)定期和衰退期，要觀察到衰退期的累計(jì)培養(yǎng)時(shí)間非常長(zhǎng)。在依賴哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行生物制品生產(chǎn)的過程中，尤其需要避免此種細(xì)胞密度下的接種培養(yǎng)，以免造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失和時(shí)間浪費(fèi)。